概述:甜蜜素是食物生产中常用的甜味添加剂,其甜度是蔗糖的30~40倍,控制限量对人们的身体康健有主要意义。《GB 2760-2014 食物添加剂使用标准》中用于界定食物添加剂使用规模的食物分类系统,白酒属于蒸馏酒,不允许使用甜蜜素。本要领参照GB/T 5009.97-2003及相关文献资料,对白酒中的甜蜜素经提取后,在冰浴条件下,与亚硝酸钠爆发重氮化反应天生衍生物环己醇亚硝酸酯,衍生物进入气相色谱质谱联用仪举行疏散检测。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
pg网站麻将胡了气相色谱-质谱联用仪:GC-MS 6800
甜蜜素标准储备溶液:称取一定量的甜蜜素标准品(纯度为99.0%)于干燥容量瓶中,用水配成1000mg/kg标准储备溶液。
试剂均为优级纯,试验用水为二次蒸馏水。
1.2 仪器事情条件
1.2.1
气相色谱条件
DB-5毛细管色谱(30m ×0.25mm,0.25um);载气:氦气(纯度为99.999%),载气流量1.0mL/min;进样口温度250℃,进样量1.0uL,进样方法为分流进样,分流比10:1;程序升温:初始温度为40℃,坚持时间10min,以25℃/min速率升至270℃,坚持时间5min。
1.2.2
质谱条件
电子轰击离子源(EI),四级杆温度150℃,接口温度280℃;收罗方法为选择离子监测扫描(SIM),溶剂延迟时间6min,选择3个监测离子质荷比(m/z)为55,81,83。
1.3 实验要领(略)
2 效果与讨论
2.1 特征和离子的选择
甜蜜素的主要衍生物环己醇亚硝酸酯作为定性和定量,如图1。保存时间8.511min.定性离子(m/z)为55,81,83。定量离子为55。质谱图见图2.

图1、甜蜜素衍生物在总离子流色谱图
Figure 1、 Cyclamate derivatives total ion
chromatogram
图2、甜蜜素衍生物的质谱图
Figure 2、 Cyclamate derivative spectrum
图3、甜蜜素衍生物在SIM扫描下的离子流色谱图
Figure 3、 Cyclamate
derivative SIM under scanning ion chromatogram
图4、甜蜜素衍生物在SIM扫描下的质谱图
Figure 4、 Cyclamate derivative SIM
under scanning spectrum
2.2 前处置惩罚条件选择
2.2.1 衍生时间选择
准确吸收的1ml甜蜜素储备液溶液凭证上述衍生办法举行衍生化,甜蜜素衍生物浓度为200ug/mL,衍生反应时间划分设置为10min、20min、30min、40min、50min,考察反应时间对反应的影响。效果批注,随着时间从10min升至30min,衍生物信号响应值逐渐增添,随着反应时间的延伸,响应值反而泛起降低,因此,衍生反应温度30min最佳。
2.2.2
硫酸浓度的选择
准确吸收的1mL甜蜜素储备液溶液凭证上述衍生办法举行衍生化,甜蜜素衍生物浓度为200ug/mL,冰浴反应条件下,加入50g/L的亚硝酸钠和划分为50g/L,75g/L,100g/L,125g/L,150g/L。效果批注,酸度从50g/L至100g/L,反应衍生物信号响应值显着增添,浓度升高时,响应值泛起镌汰,因此,最终衍生反应酸度为100g/L。
2.2.3 亚硝酸钠浓度对衍生反应的影响
准确吸收的1ml甜蜜素储备液溶液凭证上述衍生办法举行衍生化衍生化,甜蜜素衍生物浓度为200ug/mL,冰浴反应条件下,加入100g/L的硫酸,和划分为30g/L,50g/L,70g/L,90g/L亚硝酸钠。效果批注,酸度从30g/L至50g/L,反应衍生物信号响应值显着增添,浓度升高时,响应值泛起镌汰,因此,最终亚硝酸钠衍生反应为50g/L。
3 实验数据
3.1 细密度和重复性实验
准确移取储备液500uL于离心管中,用水定容20mL凭证上述标样衍生办法举行衍生化,衍生物浓度为100ug/mL,平行制备反应液6次,用GC-MS测定�?疾煅苌斓闹叵中砸约白榉直4媸奔浜头迕婊南喽员曜嘉蟛�,6个平行样的谱。效果批注,保存时间RSD为0.98%,峰面积RSD为6.00%,,详细实验数据如下表1所示 。
表1、重复性测试效果
Table 1, repeatable test results
|
样品名称
|
保存时间
|
保存时间RSD%
|
峰面积
|
峰面积RSD%
|
|
1
|
8.611
|
0.98%
|
96798
|
6.00%
|
|
2
|
8.518
|
99549
|
|
3
|
8.406
|
105518
|
|
4
|
8.431
|
99798
|
|
5
|
8.411
|
87708
|
|
6
|
8.410
|
96500
|
3.2 线性关系和检测限
准确吸收浓度为10ug/mL的甜蜜素标准溶液10ul于50ml离心管中对应衍生物浓度划分为2ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、100ug/mL、200ug/mL,凭证上述标样衍生化办法举行衍生化,举行线性测试。实验所得线性方程为:y=940.43x-3525.57,线性相关系数为0.9984,如图5所示。
图5. 线性关系图
Figure 5,Linear
3.3 接纳率测试
选择2mg/kg、50mg/kg、200mg/kg的标样添加浓度,对某品牌白酒举行接纳率实验,每个浓度划分做三次平行样,按处置惩罚样品的要领处置惩罚加标后的样品并测试,接纳外标法定量,测试效果如下表2所示。
|
浓度/mg/kg
|
接纳率1/%
|
接纳率2/%
|
接纳率3/%
|
平均接纳率/%
|
|
2
|
109.6
|
104.7
|
107.7
|
107.3
|
|
50
|
99.84
|
113.7
|
103.5
|
105.7
|
|
200
|
108.3
|
114.9
|
116.7
|
113.3
|
表2、接纳率测试效果
Table 2, the recovery test results
3.4 现实样品测试
凭证上述样品处置惩罚要领对差别品类的白酒样品举行前处置惩罚和衍生化,使用GC-MS6800举行测试,测试效果如下表3所示:
|
样品
|
甜蜜素含量/mg/kg
|
|
酒样品1
|
N.D.
|
|
酒样品2
|
N.D.
|
|
酒样品3
|
N.D.
|
|
酒样品4
|
N.D.
|
|
酒样品5
|
N.D.
|
注:“N.D”体现“未检出”
表3.、酒中甜蜜素含量测试效果
4 结论
本实验接纳GCMS-6800,在SIM扫描模式下对酒中的甜蜜素举行测试和剖析,要领稳固可靠,线性规模好,迅速度高,受杂质峰的滋扰小,能够有用地对酒中的甜蜜素举行定性定量剖析。